Zasada działania
Różne rodzaje instrumentów krzepnięcia wykorzystują różne zasady. Obecnie głównymi metodami wykrywania są metoda koagulacji, metoda chromogenna substratu, metoda immunologiczna, metoda aglutynacji lateksu itp.
1. Metoda koagulacji (metoda biofizyczna)
Metoda koagulacji polega na wykryciu zmian szeregu wielkości fizycznych (światło, elektryczność, ruch mechaniczny itp.) w plazmie pod działaniem aktywatora krzepnięcia, a następnie przeanalizowaniu uzyskanych danych przez komputer i przekształceniu ich w wynik końcowy, dzięki czemu można je również nazwać biologicznym prawem fizycznym.
2. Metoda chromogenna substratu (metoda biochemiczna)
Metoda chromogenna substratowa polega na wywnioskowaniu zawartości i aktywności badanej substancji poprzez pomiar zmiany absorbancji substratu chromogennego, którą można również nazwać metodą biochemiczną. Zasada polega na sztucznej syntezie małego peptydu, który ma podobną sekwencję aminokwasów do naturalnych czynników krzepnięcia i zawiera określone miejsce działania i łączy gen chemiczny, który można hydrolizować w celu wytworzenia koloru z aminokwasem miejsca aktywnego. Podczas oznaczania, ponieważ czynnik krzepnięcia ma aktywność enzymu proteolitycznego, może nie tylko działać na naturalny łańcuch peptydowy białka, ale także działać na syntetyczny substrat łańcucha peptydowego, uwalniając w ten sposób gen chromogenny i barwiąc roztwór. Odcień wytwarzanego koloru jest proporcjonalny do aktywności czynnika krzepnięcia, co pozwala na dokładną kwantyfikację. Obecnie istnieją dziesiątki syntetycznych substratów peptydowych, a najczęściej stosowaną jest p-nitroanilina (PNA), która jest żółta i może być mierzona przy długości fali 405 mm.
3. Metody immunologiczne
W metodzie immunologicznej oczyszczoną substancję badaną stosuje się jako antygen i przygotowuje się odpowiednie przeciwciało, a następnie substancję badaną określa się jakościowo i ilościowo za pomocą reakcji antygen-przeciwciało.
Historia rozwoju
W 1910 roku Kottman wynalazł najwcześniejszy na świecie instrument krzepnięcia, który odzwierciedla czas koagulacji osocza poprzez pomiar zmiany lepkości podczas krzepnięcia krwi.
W 1922 roku Kugelmass użył mętnego miernika do pomiaru zmiany przepuszczanego światła w celu odzwierciedlenia czasu koagulacji plazmy.
W 1950 roku Schnitger i Gross wynaleźli aparat krzepnięcia oparty na metodzie elektro-galwanicznej.
W 1960 roku opracowano mechaniczne instrumenty krzepnięcia i pojawiła się wczesna planarna metoda koralików magnetycznych.
Po 1970 roku, ze względu na rozwój przemysłu mechanicznego i elektronicznego, sukcesywnie pojawiały się różnego rodzaju automatyczne instrumenty krzepnięcia.
W 1980 roku, ze względu na pojawienie się substratów chromogennych i ich zastosowanie w wykrywaniu krzepnięcia krwi, automatyczny instrument krzepnięcia może nie tylko wykonywać ogólne testy przesiewowe, ale także wykrywać pojedyncze czynniki układów krzepnięcia, antykoagulacji i fibrynolizy. Możliwe staje się wykrycie antykoagulacji i fibrynolizy.
Pod koniec 1980 roku wynalezienie metody podwójnego obwodu magnetycznego przyniósł nową koncepcję wykrywania skrzepliny i hemostazy. Ze względu na unikalną zasadę projektowania, niektóre czynniki wpływające na detekcję optyczną nie istnieją już w tego typu instrumencie detekcji.
W 1990 roku rozwój kanału immunologicznego automatycznego instrumentu krzepnięcia zintegrował różne metody wykrywania, a elementy wykrywania były bardziej wszechstronne, co zapewniło nową metodę wykrywania skrzepliny i hemostazy.